Implementación del modelo para caracterización de Bacillus thuringiensis serovar neoleonensis (T24001) en el contexto de cáncer de cuello uterino
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López Pazos, Silvio Alejandro | 2020
RESUMEN
Varias cepas de la bacteria entomopatógena Bacillus thuringiensis han sido descritas
con actividad citotóxica sobre células cancerosas en cultivo in vitro, incluyendo líneas HeLa,
MOLT-4, y Jurkat entre otras. Esta actividad se ha asociado a una clase de proteínas
denominadas parasporinas (PS), las cuales pertenecen al grupo de proteínas insecticidas Cry,
Estas PS generan apoptosis en células cancerígenas. En este proyecto se implementó un
modelo in vitro para cultivo de células de cáncer de cuello uterino, junto con la
caracterización de la cepa B. thuringiensis serovar neoleonensis (T24001), que tiene actividad
citotóxica contra la línea tumoral de células T de leucemia (MOLT-4). Con esto en mente, la
cepa de trabajo se caracterizó por microscopia de luz y de contraste de fases, se le realizó
prueba de sensibilidad a antibióticos (ampicilina, tetraciclina y gentamicina), y finalmente se
extrajo purificó cristales parasporales de B. thuringiensis serovar neoleonensis (T24001), los
cuales se cuantificaron mediante el método de Bradford, luego se determinó presencia de las
proteínas correspondientes en electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), y poder
visualizar la presencia de posibles PS. Para el cultivo de células de cáncer de cuello uterino se
usaron las líneas HeLa y SiHa provenientes de tejido tumoral de cáncer de cuello uterino, con
el fin de obtener un modelo estable, constante y reproducible, donde se utilizaron viales que
contenían las células en medio de congelación (suero fetal bovino + dimetil sulfuro), las
cuales se cultivaron en medio DMEM-High y se incubaron a 37°C en atmosfera de CO2.
Estas células se observaron desde las 24 horas con microscopio invertido para determinar
confluencia celular de 90%, óptima para ensayos de viabilidad celular mediante el ensayo
Tripan Blue, encontrando que las células HeLa son más resistentes a la manipulación que las
células SiHa, al utilizar concentraciones celulares conocidas desde 5000 células/ml hasta
40000 células/ml en pruebas de cuatro días, que sean útiles para futuros ensayos de
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citotoxicidad. Este trabajo aporta al área de determinación de PS como posible agente
anticancerígeno gracias a su actividad específica contra células tumorales, y su inocuidad
hacia células de tejidos sanas.
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